小鼠腹腔原代巨噬细胞模拟肿瘤微环境的转录组学分析*
曾嘉仪 王帅 张一帆 何晓东**
（山东大学公共卫生学院 济南 250014）

目的：巨噬细胞是参与机体免疫反应的主要免疫细胞，其M2型极化形式具有与免疫细胞相反的功能，在肿瘤的生长过程中发挥了重要作用。通过构建不同模拟肿瘤外环境对巨噬细胞进行刺激，取其转录产物进行处理分析，可以获得不同酸性微环境条件下基因的富集通路及上下调相关信息，对相关靶点的进一步深入探讨，可以确定肿瘤细胞与小鼠巨噬细胞相互作用的可能机制。
方法：对8周龄C57/6N雌鼠提取腹腔巨噬细胞，成功培养后构建LPS(+)/(-)的pH6.2、pH7.4、LA、Hela细胞培养液等8种模拟肿瘤微环境，孵育后进行RNA提取、文库构建及测序、转录组学信息分析，并对差异基因集进行GO功能富集分析、KEGG通路富集分析等。
结果：对所有样品测序结果检查后发现，所有碱基测序错误率均低于0.03%：转录组信息统计分析显示，实验组间基因表达差异较大，同组样品间表达模式的相似度较高，组内样品生物重复性好；对L_7vsN _7比较组的差异基因集进行GO功能注释得知，转录分析所得的DEGs共注释到744个GO Terms中，主要分布于生物过程（biological process，BP）功能，其次为分子功能（Molecular Function，MF）和细胞组成（cellular component，CC）；转录组分析发现存在多条富集功能通路，对L_LAvsN _LA比较组的差异基因集进行同上分析可知，BP、MF、CC三个功能分组中基本上均以上调基因为主，主要包括自噬功能（autophagy）、生物体之间的相互作用（interspecies interaction between organisms）、细胞分解代谢过程的正向调节（positive regulation of cellular catabolic process）、蛋白质复合体组装的调控（regulation of protein complex assembly）等，表明LPS可调节LA对巨噬细胞的刺激作用，LPS刺激可诱导小鼠腹腔巨噬细胞分化为M1型巨噬细胞，并促进其免疫和防御反应调节；乳酸刺激可促进巨噬细胞抗炎作用，可能通过NLRs信号通路和MAPK信号通路抑制炎症反应。
结论：不同肿瘤酸性微环境条件对巨噬细胞的表达基因造成改变，转录组分析发现存在多个显著差异表达基因集和富集通路，使巨噬细胞通过调节抗炎、抑炎功能相应肿瘤微环境。通过继续深入研究肿瘤酸性微环境对TAMs的影响、深入阐述抗炎、促炎相关通路机制，研究成果将对确定可能存在的相关肿瘤治疗新靶点或新信号通路有促进意义。

 

肿瘤微环境（TME）,肿瘤相关巨噬细胞（TAM）,乳酸(LA),脂多糖（LPS）